Лабораторные исследования. Признаки пироплазмоза у собак и некоторые методы диагностики

Обследуя животное, не всегда удаётся быстро и главное точно, поставить диагноз. Упуская время остаётся всё меньше надежды на выздоровление без осложнений и только анализ крови при пироплазмозе у собак может быстро поставить диагноз.

Пироплазмида (Piroplasmidеa) - это простейшее. Проводя классификацию, пироплазму собак отнесли к роду Babesia, и болезнь назвали бабезиозом, хотя пироплазмоз также встречается как термин.

Важно! Возбудитель не живёт в природе и имеет два хозяина - собаку и клеща.

Клещ, который укусил собаку не всегда способен заразить. Животное не заболеет если:

имеет высокий иммунитет (резистентность организма);
контактирует с клещами не часто (единичные случаи);
возбудитель имеет низкую патогенность.

Если клещ передал животному пироплазму, то инкубационный период у собак проходит на протяжении 4-5 дней. Далее следует симптоматика:

угнетение;
повышение температуры (не постоянное, до 4-х дней, далее спад);
бледность видимых слизистых оболочек с дальнейшим пожелтением;
отсутствие или понижение аппетита;
моча становится кровавой.

Иногда симптомы бывают стёрты, и заболевание приобретает хронический характер. В этом случае собака:

медленно теряет вес;
резвость сменяется угнетением;
слизистые попеременно бледные и жёлтые;
аппетит временами отсутствует.

Общий анализ крови

Для диагностирования заболевания следует провести исследование с покраской мазка крови. Для этой цели кровь отбирается с внутренней поверхности ушной раковины и наносится на предметное стекло. Далее следует покраска по Романовского-Гимза. Метод

универсальный;
не требующий высокоточного инструментария и приборов;
может проводиться амбулаторно (в кабинете доктора или ветеринарной лаборатории);
быстрый.

Кроме отчётливо выявленных пироплазм существует ещё несколько пунктов указывающих на присутствие патологии:

наличие не зрелых, мелких эритроцитов (анизоцитоз) более 50%;
эритроциты будут иметь не стандартную, круглую форму, а разнообразную, деформированную (пойкилоцитоз);
окраска эритроцита будет проходить не равномерно, с включениям, высветленными зонами либо более интенсивно окрашенными (полихроматофиллия);

Если выявить пироплазму не удаётся, то проводя исследования показателей крови можно определить общее состояние животного. На патологию будут указывать:

уменьшение количества эритроцитов в два раза;
понижение уровня гемоглобина на 30%;
увеличение скорости оседания эритроцитов;
понижение количества лейкоцитов.

Характерными показателями патологии при пироплазмозе будут:

значительное уменьшение уровня тромбоцитов в крови (тромбоцитопиния);
увеличение количества моноцитов на фоне общего уменьшения лейкоцитов (моноцитоз).

Все показатели крови остаются актуальными на фоне нормы белка и глюкозы в крови, что дифференцирует пироплазмоз от других заболеваний.

Необходимо определить уровень:

билирубина. Если эритроциты разрушаются, гемоглобин преобразовывается, распадается в клетках печени, о чём и свидетельствует показатель;
мочевину. Повышение концентрации свидетельствует о нарушениях в функциональности почек.

ПЦР при пироплазмозе3

Современные лаборатории оснащены всем необходимым для проведения полимеразной цепной реакции (ПЦР).

Такое серологическое исследование позволяет поставить точный диагноз даже в инкубационном периоде. Однако совершенно неприемлемо для исследований крови животного, которое поддавалось лечению. Когда возбудителя в организме уже нет, но он оставил следы своего ДНК, реакция выдаёт - положительно. Это происходит из-за высокой чувствительности метода к следам возбудителя.

По результатам реакции можно установить диагноз, но нельзя определить продолжать лечение или терапия окончена.

О том, какие именно анализы следует провести собаке, при подозрении на пироплазмоз, может судить только квалифицированный специалист после проведённого всестороннего осмотра.

Диагностика бабезиоза необходима в том случае, если есть подозрения на наличие опасного заболевания в организме человека или животного. Бабезиоз, или пироплазмоз, представляет собой серьезное заболевание людей и животных, которое характеризуется острым процессом инфекционного генеза. Сопровождается болезнь такими проявлениями, как общая интоксикация организма, лихорадочное состояние, развитие анемии, тяжелое течение недуга с отрицательной динамикой.

У здорового человека это заболевание протекает почти без явных признаков, но простейшие — возбудители недуга — могут длительный период находиться в организме. При этом анализ на пироплазмоз показывает наличие их в крови не более 2%. Болезнетворные микроорганизмы содержатся в слюнной жидкости клещей. После того как клещ кусает, возбудители проникают в организм человека или животного. Период инкубации продолжается около 14 дней. Если простейшие попадают сразу в кровь, он сокращается до 10 дней. После этого анализ на пироплазмоз показывает уровень 5% в крови, уже начинают появляться первые признаки болезни.

Нетяжелая форма недуга схожа по признакам с острым респираторным заболеванием. Человек испытывает сильную слабость, озноб, у него повышается температура до критических отметок, появляется ломота в суставах и мышцах. Анализ крови показывает наличие анемии. Характерным отличием бабезиоза от простуды является неэффективность стандартного лечения простуды. Одним из наиболее эффективных методов лечения является переливание крови при пироплазмозе.

Если форма болезни тяжелая, она протекает остро. Отмечается гипертермия, температуру невозможно сбить. Параллельно происходит разрушение клеток крови, анализ крови показывает повышенное количество билирубина. Появляется желтушность кожного покрова, печень увеличивается в размерах, начинается сбой в функционировании почек и всей мочевыделительной системы. Тяжелым осложнением болезни является острая почечная недостаточность и летальный исход. Очень редко бабезиоз приобретает хроническое течение, которое характеризуется расстройствами психики вследствие поражения центральной нервной системы.

Диагностические мероприятия: мазок

Так как специфические признаки болезни отсутствуют, постановка диагноза затруднена. Поскольку количество зараженных людей было очень мало, лабораторные исследования болезни развиты плохо. Доктором назначается анализ крови при пироплазмозе после предварительного сбора анамнестических данных, таких как:

продолжительное пребывание в сельских местностях, на природе или в лесу;
укус клеща накануне начавшихся проявлений.

Первоначально следует дифференцировать болезнь от других заболеваний, которые имеют схожие признаки:

ВИЧ-инфекция;
сепсис;
разновидности малярии;
геморрагическая лихорадка.

Микроскопическое исследование показывает хороший результат только в острой форме пироплазмоза. При переходе болезни в хроническую форму такой метод является нерезультативным. Большим преимуществом такого метода исследования является скорость его выполнения. Микроскопическое исследование крови на пироплазмоз выполняется на протяжении нескольких минут после забора крови. Но существуют и минусы такого исследования. Среди них низкая чувствительность и специфичность, такой анализ показывает определенные неточности. Еще одним минусом является низкая воспроизводимость. Поэтому большинство современных лабораторий предпочитает более инновационные способы исследования.

Биологический метод диагностики

Одним из наиболее точных методов является ПЦР (полимеразная цепная реакция). Такой метод дает возможность обнаружить и провести расшифровку ДНК простейших, которые вызывают заболевание. С помощью такого метода становится возможным поставить точный диагноз — бабезиоз.

Глисты могут бессимптомно жить в вашем организме годами и продукты их жизнедеятельности будут мешать работе вашего организма и вызывать другие болезни, течение которых чаще становится хроническим.

Вам знакомы следующие симптомы не понаслышке:

тошнота;
газы и вздутие;
частые простуды;
плохой сон;
проблемы с весом;
излишняя нервозность;
утомляемость;
проблемы с кожей?

Конечно, у каждого специалиста есть свои мнения и догадки относительно бабезиоза, но в отсутствии полноценной молекулярной диагностики они остаются только догадками и уделом меньшинства специалистов.

Таблица 1

			Вектор передачи	Географ. распростран.
Большой бабезиоз (пироплазмоз)	Babesia vogeli	Babesia canis vogeli	Rhipicephalus sanguineus	Широкое распространение
	Babesia canis	Babesia canis canis	Dermacentor spp.
	Babesia rossi	Babesia canis rossi	Haemaphysalis elliptica	Районы Сахары, Африка
	Babesia sp .	Неклассиф. Babesia sp .	Неизвестен	Северная Каролина, США
Малый бабезиоз (пироплазмоз)	Babesia gibsoni	Babesia gibsoni Азиатск. штамм	Haemaphysalis longicornis , собачьи бои	Азия, включая Японию
	B . conradae	B . conradae	Ixodes hexagonus	Запад США
	Theileria annae	Babesia microti -like	Ixodes hexagonus	Испания, Португалия Spanish isolate
	Theileria sp.	Неклассифиц. Theileria sp .	Неизвестен	Южная Африка
	Theileria annulata		Неизвестен	Африка, Европа, Азия
	Theileria equi	Babesia equi	Неизвестен	Африка, Европа, Азия

Большинство специалистов признают, по крайней мере, три возбудителя «малого» бабезиоза (пироплазмоза) у собак. Они отличаются по клиническим и генетическим характеристикам, это Babesia gibsoni , Babesia conradae . В другом исследовании бабезии (пироплазмы) были выделены от больных собак на западе США и описаны в оригинальном исследовании как B . gibsoni и Babesia microti —like , последняя позже идентифицирована как Theileria annae (табл. 1).

Кроме того, имеются сообщения о выделении из крови собак, больных бабезиозом, три разновидности Theileria . У небольшого числа собак в Европе были выделены Theileria (Babesia ) equi и Theileria annulata ; и у 82 собак в Южной Африке была выделена неклассифицированная Theileria sp — Южно-Африканская Theileria sp . .

При световой микроскопии интроэритроцитарные стадии Babesia spp . неразличимый от Theileria spp .

На сегодняшний день установлены зоны распространения бабезиоза собак, они перечислены в таблице 1; имеется всесторонняя и современная карта распространения клещевых инфекций собак Европы, Восточной и Юго-Восточная Азии . Как и ожидалось, географическое распространение клещевых инфекций полностью связано с географическим распространением клещей-переносчиков этих заболеваний. Интересно отметить, что распространение Babesia gibsoni не связано с распространением каких-либо клещей, и быстрое глобальное распространение этого возбудителя связано с его уникальной возможностью прямой передачи от больной собаки к здоровой через укусы, минуя какие-либо клещевые векторы .

На сегодняшний день Babesia vogeli является самой распространенной пироплазмой собак, что связано с широчайшим распространением вектора – коричневого собачьего клеща (Rhipicephalus sanguineus ) (табл. 1). Babesia vogeli распространена повсеместно, в тропических и субтропических областях, а также в более прохладных широтах, где кроме Babesia vogeli распространена другая большая бабезия – Babesia canis . Такое распространение часто приводит к микст-инфекциям. Babesia canis передается Dermacentor spp . и имеет все более и более широкое распространение в центральной Европе, тогда как совсем недавно считалось, что ее распространение ограничено Францией .

Babesia rossi преимущественно распространена в Африке (вместе с B . vogeli и B . gibsoni ). Первоначально этот агент был выделен только в Южной Африке, но на сегодняшний день есть сообщения о его выделении и в других регионах Африканского континента, включая Нигерию и Судан , где его распространяют клещи Haemaphysalis spp ., являющиеся энзоотичными для этих мест (табл. 1).
Среди малых бабезий наибольшее географическое распространение получила B . gibsoni . Методом молекулярной идентификации она была обнаружена в южных, восточных и юго-восточных азиатских странах, получив наибольшее распространение там, где практикуются незаконные собачьи бои.

Во всем мире иммуноферментный анализ на протяжении последних 30 лет был самым распространенным тестом на бабезиоз (пироплазмоз) собак . Однако неудовлетворительная специфика из-за перекрестных реакций между Babesia spp . и другими микроорганизмами Apicomplexa , вносили субъективность в окончательные результаты исследования и мешали крупномасштабному применению этих методик. С 2000 года для диагностики бабезиоза начал активно внедряться метод ПЦР.

Возможность ПЦР-диагностики в обнаружении ДНК бабезий (пироплазм) при хроническом течении заболевания можно улучшить, проверяя не один, а несколько образцов крови от подозреваемого животного .

Тяжесть течения бабезиоза у собак и кошек колеблется от субклинической инфекции, при которой развивается невыраженная анемия, до очень тяжелого течения заболевания с развитием синдрома мультиорганного расстройства и быстрой гибели. Факторами, определяющими тяжесть течения, являются вид пироплазмы, вызвавшей заболевание, порода собаки, а также особенности физиологического состояния животного, такие как возраст, иммунный статус, наличие микст- инфекций, а также преморбидное состояние животного. Все виды бабезий (пироплазм) могут вызвать лихорадку, анорексию, спленомегалию, анемию и тромбоцитопению в результате прямого повреждения и разрушения эритроцитов хозяина (гемолиз), снижения осмотической резистентности зараженных эритроцитов.

Клинические особенности бабезиоза были рассмотрены с разных сторон . При длительном наблюдении выявлено, что из всех больших бабезий Babesia vogeli является наименее патогенной, по крайней мере, у взрослых собак, и вызывает самые мягкие формы бабезиоза, часто развиваются хронические формы заболевания. А самой патогенной бабезией является Babesia rossi , выделенная в Африке .

У собак, зараженных Babesia rossi , часто развиваются различные осложнения. При этом такие как гепатопатия и иммунооблусловленный гемолиз утяжеляют течение заболевания, но не вызывают смерть, если должным образом проводится терапия. В то время как ДВС-синдром, энцефалиты, острая почечная недостаточность и отек легких требуют ранней и очень интенсивной терапии. При этом прогноз остается плохим . Напротив, бабезиоз (пироплазмоз), вызываемый Babesia vogeli , часто протекает субклинически, но у щенков в возрасте до 3-4 месяцев заболевание может быть фатальным (рис. 1-5).

Кроме того, бабезиоз (пироплазмоз), вызываемый Babesia vogeli , тяжело протекает у собак с иммунодепрессией, получающих химиотерапию по поводу онкологических заболеваний, после хирургических вмешательств, особенно после спленэктомии.

Тяжесть течения бабезиоза (пироплазмоза), вызванного Babesia canis , Babesia gibsoni , Theileria annae и Babesia conradae , колеблется от умеренного до тяжелого, но может наблюдаться широкий диапазон тяжести клинического состояния и осложнений в зависимости от индивидуальных особенностей животного (рис. 6) .

Клинико-патoлогическое исследование собак, пораженных Theileria annae на Северо-Западе Испании, показало, что у 36% собак (n = 58) отмечалась азотемия; у этих животных смертность была в 10 раз выше, чем у собак без азотемии. . К сожалению, в этих исследованиях не приведены данные, показывающие корреляцию тяжести заболевания с выраженностью азотемии, но высокий белок в моче, повышенный креатинин, гипоальбуминемия и гиперхолестеринемия у больных собак заставила авторов предположить, что наиболее вероятной причиной поражения почек у собак при инфекции Theileria annae является гломерулонефрит . Вместе с тем исследования уровня азотемии у собак, зараженных B . rossi , показали, что уровень креатинина и мочевины не являлся прогностическим показателем возникновения острой почечной недостаточности с плохим прогнозом . В недавних исследованиях эндокринных маркеров болезни установлено, что отмечается корреляция между высокой смертностью собак, больных бабезиозом, вызванным B . rossi , и высоким уровнем кортизола и АКТГ, при одновременно низком уровне T4 .

До сегодняшнего дня нет ясности в клинических последствиях носительства и хронического течения бабезиоза. Имеются данные как о тяжелом прогнозе для животных с таким течением бабезиоза, так и о полном выздоровлении. Имеются сообщения о том, что у большинства собак после незначительных клинических проявлений заболевания развивается преиммунное состояние, которое может закончиться иммуннообусловленными осложнениями или развитием клинического заболевания в более позднее время. Вместе с тем хроническая инвазия может вообще не иметь никаких последствий для собак, а в неблагополучных районах — даже приводить к устойчивости животных к пироплазмозу .

Имидокарба дипропионат и диминазин ацетурат являются широко используемыми антипироплазменными препаратами. Но в течение многих лет использовались и другие препараты с различным терапевтическим эффектом, например, такие как квинурониума сульфат, трипан синий, пентамидин, фенамидин, парваквон. В разных странах регистрационные комитеты ограничили применение многих из этих препаратов, так как некоторые (особенно диамидин – производное диминазина) ассоциированы с высокой токсичностью и многими побочными эффектами. В лучшем случае эти препараты приводили к улучшению клинических признаков и редко — к элиминации возбудителя из организма собаки .

Сообщается об экспериментальном заражении и последующей терапии 4 собак. Исследователи добились излечения собак, зараженных B. g ibsoni, по следующему протоколу: диминазин в комбинации с клиндамицином и метронидазолом (15 мг/кг каждые 12 часов) и доксициклином (5 мг/кг каждые 12 часов) . Успешным оказалась терапия этих собак также по следующему протоколу: азитромицин (10 мг/кг каждые 12 часов) и atovaquone (13.3 мг/кг каждые 8 часов) в течение 10 дней.

Эффективность лечения определялась по нормализации клинических признаков и отсутствию ДНК B . gibsoni в периферической крови, определяемой методом ПЦР. Десятидневный курс лечения заболевания, вызванного B . gibsoni , сопровождался клинической эффективностью и отсутствием побочных эффектов. Вместе с тем цена на atovaquoneограничивает применение этого препарата, особенно там, где он больше всего нужен, — в азиатских странах. Более дешевые формы atovaquone с proguanil вызывают тяжелые побочные эффекты со стороны ЖКТ у собак (доступность данных препаратов в РФ ограничена).

К сожалению, эта комбинация препаратов также не приводит к выздоровлению у некоторых собак, при этом быстро возникает устойчивость к atovaquone, вызванная мутацией гена b-цитохрома .

Профилактировать бабезиоз (пироплазмоз), как и любое другое векторное заболевание, проще всего, не допуская нападения клещей на собак, но достичь этого практически невозможно, особенно в эндемичных районах, несмотря на широкое применение репеллентных спреев и ошейников .

Несколько препаратов были исследованы с целью их профилактического применения против бабезий, и ни один не дал надежных результатов. В Европе наиболее часто применяется однократная доза имидокарба (имидокарба дипропионат) в дозе 6 мг/кг, которая защищает собак от B . canis до 8 недель, его действие усиливается при одновременном применении доксициклина в дозе 5 мг/кг в день, особенно против высокопатогенных B . canis . .

Все данные по распространению различных видов бабезий получены из зарубежной литературы и касаются распространения бабезиоза за пределами Российской Федерации. Данные по распространению различных видов бабезий в России в доступной отечественной литературе мы не нашли.

Материал и методы исследования. Исследования были проведены на 100 собаках, поступивших в клиники Ростовской области в период с начала октября по конец ноября (2010 года).

Все собаки были клинически здоровы, и у них не ставился диагноз бабезиоз (пироплазмоз) за весь предшествующий весенне-летний период. У животных отбиралась и стабилизировалась EDTA кровь. Исследования на бабезиоз (пироплазмоз) проводили методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) с гибридизационно-флуоресцентной детекцией.

Анализ нуклеотидных полноразмерных геномов и участков различных генов бабезий, взятых из базы данных GenBank (NCBI) последовательностей, проводили с применением пакета прикладных программ «BioEdit 6.0». Исходя из нуклеотидного состава геномов бабезий разных видов, нами были выбраны участки 18S рРНК-гена, наиболее консервативные среди известных изолятов. На консервативные участки были рассчитаны родоспецифические праймеры BabspF (5’-GTTGCTTCTTAGAGGGACTTTGG-3’) и BabspR (5’-GCTCTAAGCCCTGAGGAAGTTTAAG-3’), фланкирующие участок в 282 пары нуклеотидов (п.н.).

Для идентификации вида бабезий исследовалась кровь от собак на присутствие видоспецифичных участков гена 18S рРНК. Исходя из диагностической ценности эксперимента для обнаружения кДНК конкретных видов бабезий, был выбран «стандартный» вариант ПЦР. С этой целью были сконструированы праймеры BrosF (5’-CTCACCAGGTCCAGACAAACG-3’) и BrosR (5’-GTAGGATTGACAGATTGATAGCTC-3’) к B . rossi , BcanF (5’-GATTCTTTGGGTGGTGGTGCATG-3’) и BcanR (5’-CGTTCTTAGTTGGTGGAGTGAT-3’) к B . canis и BvogF (5’-TGTCTGGTTAATTCCGTTAAC-3’) и BvogR (5’-GAACGAGACCTTAACCTGCTAACT-3’) к B . vogeli . Рассчитанные видоспецифичные праймеры для выявления кДНК имели высокую температуру отжига 62-64°С, это позволило объединить два этапа реакции (отжиг и элонгацию) в один. В результате удалось значительно снизить время постановки реакции, что не повлияло на её специфичность и чувствительность. Постановку ПЦР проводили в реакционной смеси стандартного состава с использованием 10 пкМ каждого праймера, 5 мкл раствора кДНК с добавлением 3 мM MgCl 2 .

Результаты исследования.
Нами были собраны клещи с территории Ростовской области с идентификацией их вида, результаты исследования занесены в таблицу 2.

Из таблицы видно, что наиболее ожидаемым видом бабезий, распространенным на территории Ростовской области, будет Babesia canis .

Таблица 2

Видовой состав иксодофауны Ростовской области

Виды иксодид	Количество особей	Виды бабезий, передаваемые клещами


Dermacentor marginatus		Babesia canis
Dermacentor pictus		Babesia canis
Hyalomma scupense		Theileria sp.
Hyalomma detritum		нет данных
Rhipicephalus sanguineus		Babesia vogeli
Ixodes ricinus		Babesia canis

Из 100 собак, у которых была отобрана кровь на носительство бабезиоза, у 12 был получен положительный результаты в реакции ПЦР с гибридизационно-флуоресцентной детекцией (рис. 12). Таким образом, носительство бабезиоза в Ростовской области составило 12%. Наибольшее распространение бабезиоз (пироплазмоз) получил среди таких пород как немецкая овчарка, метисы и таксы, но, учитывая незначительное количество собак, возможно, эта тенденция отображает только высокую распространенность данных пород в Ростовской области. Чтобы точнее ответить на этот вопрос, потребуются дополнительные исследования.

Таблица 3

Распространение носительства бабезиоза по породам собак

Порода собаки	Номер исследования	Количество животных	Процент, %
Немецкая овчарка
Метис
Такса
Ротвейлер
Курцхаар
Русский спаниель
Лабрадор
Питбультерьер
Не указано

Нами были проведены дальнейшие исследования материала, положительного на наличие родовых генов к бабезиям. Все 12 положительных материалов были дополнительно исследованы в реакции ПЦР для определения вида возбудителя. Из 12 исследованных положительных материалов клинически здоровых животных положительный тест на B. canis оказался у 9 животных, номера исследования – 1, 7, 15, 28,29, 33, 35, 44, 56. Что составило 9 % от числа всех исследованных животных и 75% — от числа всех носителей. В 4 случаях тест оказался положительным на B . vogeli , номера исследования – 1, 15, 33, 35, что составило 4 % от числа всех исследованных животных и 33,3 % — от числа всех носителей. На B . rossi все пробы оказались отрицательными. При этом, как видно из рис. 7 и цифровых значений исследования, все животные, зараженные B . vogeli , были заражены и B . canis . Таким образом, в Ростовской области широко распространена микст-инвазия B . vogeli и B . canis .

Вместе с тем пробы 10, 39, 95 оказались отрицательными на B . vogeli , B . canis и B . rossi , что указывает, что в Ростовской области распространены не только эти бабезии (пироплазмы), но и другие виды. Мы планируем продолжить исследование и в ближайшее время представить материал о распространении всех видов бабезий на территории Ростовской области.

Выводы. Таки образом, на сегодняшний день бабезиоз (пироплазмоз) собак остается важной клинической проблемой, несмотря на серьезные достижения последних лет в понимании патогенеза этого заболевания. Остаются нерешенными проблемы передачи инфекции и ее патофизиологический механизм, много нерешенных вопросов в диагностике заболевания и терапии этой инвазии, открытыми остаются вопросы профилактики данного заболевания.

В настоящее время выделены неклассифицированные возбудители заболевания, не до конца выявлен ареал распространения, который, по всей видимости, будет продолжать расширяться из-за международного движения собак и расширения ареала клещей.

Носительство бабезиоза у собак в Ростовской области в конце периода передачи инвазии составляет 12 %, при этом инцидентность носительства B . canis составляет 9 % от числа всех исследованных животных, или 75% — от числа носителей, микст-инвазия B . canis и B . vogeli составила 4 % от числа всех исследованных животных, или 33,3 % — от числа всех носителей, в 25 % случаев идентифицировать вид бабезии (пироплазмы) не удалось.

Необходимо напомнить, что, по данным зарубежных авторов, носительство может приводить к аутоиммунным анемиям, поражениям почек и развитию фатальной почечной недостаточности. Поставить диагноз методом световой микроскопии таким животным невозможно, и при обычном исследовании в ветеринарной клинике такие диагнозы проходят как криптогенные, а гибель животных связывают с другими причинами.

Литература

Peter J Irwin, Canine babesiosis: from molecular taxonomy to control /4th International Canine Vector-Borne Disease Symposium Seville, Spain. 26–28 March 2009.
Kjemtrup AM,Wainwright K, Miller M, Penzhorn BL, Carreno RA: Babesia conradae, sp. nov., a small canine Babesia identified in California. Vet Parasitol 2006, 138:103-111.
Zahler M, Rinder H, Schein E, Gothe R: Detection of a new pathogenic Babesia microti-like species in dogs. Vet Parasitol 2000, 89:241-248.
Camacho AT, Pallas E, Gestal JJ, Guitiàn FJ, Olmeda AS, Goethert HK, Telford SR: Infection of dogs in north-west Spain with a Babesia microti-like agent. Vet Rec 2001, 149:552-555.
Criado-Fornelio A, Martinez-Marcos A, Buling-Saraña A, Barba-Carretero JC: Molecular studies on Babesia, Theileria and Hepatozoon in southern Europe Part I: Epizootiological aspects. Vet Parasitol 2003, 113:189-201
Matjila PT, Leisewitz AL, Ooshuizen MC, Jongejan F, Penzhorn B: Detection of a Theileria species in dogs in South Africa. Vet Parasitol 2008, 157:34-40.
Yamasaki M, Inokuma H, Sugimoto C, Shaw S, Aktas M, Yabsley MJ, Yamato O, Maede Y: Comparison and phylogenetic analysis of the heat shock protein 70 gene of Babesia parasites from dogs. Vet Parasitol 2007, 145:217-227
Birkenheuer AJ,Correa MT, Levy MG, Breitschwerdt EB:Geographic distribution of babesiosis among dogs in the United States and association with dog bites: 150 cases (2000-2003). J Am Vet Med Assoc 2005, 227:942-947.
Jefferies R, Ryan UM, Jardine J, Broughton DK, Robertson ID, Irwin PJ: Blood, bull terriers and babesiosis: further evidence for direct transmission of Babesia gibsoni in dogs. Aust Vet J 2007, 85:459-463.
57. Lobetti RG, Jacobsen LS: Renal involvement in dogs with babesiosis. J Sth Afr Vet Assoc 2001, 72: 23-28.
de Scally MP, Lobetti RG, Reyers F, Humphris D: Are urea and creatinine values reliable indicators of azotaemia in canine babesiosis? J Sth Afr Vet Assoc 2004, 75:121-124.
Schoeman JP, Rees P, Herrtage ME: Endocrine predictors of mortality in canine babesiosis caused by Babesia canis rossi. Vet Parasitol 2007, 148:75-82.
Wulansari R,Wijaya A,Ano H, Horii Y, Nasu T,Yamane S, Makimura S: Clindamycin in the treatment of Babesia gibsoni infections in dogs. J Am Anim Hosp Assoc 2003, 39:558-562.
Suzuki K,Wakabyashi H,Takahashi M, Fukushima K,Yabuki A, Endo Y: A possible treatment strategy and clinical factors to estimate the treatment response in Babesia gibsoni infection. J Vet Med Sci 2007, 69:563-568.
Vercammen F, de Deken R, Maes L: Prophylactic treatment of experimental canine babesiosis (Babesia canis) with doxycycline. Vet Parasitol 1996, 66:251-255.

доктор биологических наук, профессор Карташов С.Н. ,
кандидат ветеринарных наук Ключников А.Г.

Этиология

Симптомы пироплазмоза у собак.

Продолжительность инкубационного периода составляет от 1-5 дней до двух-трех недель после укуса. Опасная болезнь может проявиться и на следующие сутки после инфицирования. Если заражение бабезиозом произошло во время переливания крови, клинические проявления отмечают уже на вторые сутки. Интенсивность, выраженность симптомов зависит от возраста животных, состояния иммунной системы, резистентности организма, стадии, формы заболевания.
Пироплазмоз у собак протекает в острой и хронической форме, при этом особо тяжелое течение болезни отмечают у щенков, представителей декоративных пород. Болезнь опасна тем, что даже после полного выздоровления возможны осложнения.
Коварность недуга заключается в том, что владельцы собак не сразу могут заметить ухудшение в состоянии домашнего любимца, связывая ухудшение состояния с жарой, перегревом собаки. Но в случае с пироплазмозом каждая минута играет важную роль.

Симптомы пироплазмоза у собак:

Резкое снижение физической активности. Собака выглядит вялой, апатичной, слабо реагирует на внешние раздражители.
При острой стадии отмечают резкое повышение температуры (до 41-41.5 градусов). температура не спадает в течении первых двух-трех суток.
Отказ от корма, любимых лакомств. Появляется жажда, собака постоянно и в больших количествах пьет воду.
Анемичность, желтушность слизистых. Склера, слизистые глаз, кожные покровы приобретают явно выраженный желтушный оттенок, что связано с нарушением в работе печени.
Затрудненное дыхание, одышка, повышение частоты сердечных сокращений.
Диарея, в каловых массах заметны кровяные сгустки, рвота, приступы тошноты.

Еще одним характерным симптомом, по которому диагностируют бабезиоз у собак, является изменение цвета мочи. Моча приобретает темно-бурый, красноватый оттенок. Цвет мочи изменяется при попадании в нее крови. По мере прогрессирования заболевания развивается сильная интоксикация организма, нарушается функционирование внутренних органов и систем организма.
Хроническая стадия пироплазмоза является редкой. Диагностируют у собак с высокой резистентностью организма, а также беспородных собак, переболевших ранее бабезиозом животных. При данной стадии коварного недуга клинические проявления малозаметны. В первые дни возможно незначительное повышение температуры, потемнение мочи, ухудшение общего физиологического состояния, желтушность слизистых, после чего состояние животного нормализуется.

Диагностические методики.

Диагноз на пироплазмоз у собак ставят комплексно. Ветеринарные специалисты в клиниках проводят ряд лабораторных исследований. Диагностические методики включают:
общий осмотр животных;
серологические исследования, биохимический анализ крови для обнаружения в клеточных структурах крови бабезий;
взятие на анализ мочи (цвет, наличие гемоглобина);
дифференциальную диагностику, ПЦР.

В сомнительных случаях, при повторном заражении через две-три недели может быть проведена повторная диагностика, в особенности ряд биохимических, серологических анализов. Повторные анализы позволят получить более точную картину, так как в первые дни, если состояние собаки ухудшается, на лицо все клинические проявления пироплазмоза, на момент взятия анализа, в эритроцитах могут быть не обнаружены бабезии, что приводит к неточной постановке диагноза.
Учитывая специфику болезни, не стоит забывать, что каждый день промедления может стоит жизни вашей собаки, поэтому рекомендуем пройти экспресс-анализ (не путать с экспресс-тестом).

Лечение пироплазмоза у собак.

Для лечения пироплазмоза у собак ветеринарные врачи назначают специфические лекарственные препараты. Схема, продолжительность курса лечения, дозировку медикаментозных средств должен назначать только лечащий ветврач.

Лечение пироплазмоза у собак в обязательном порядке включает инфузионную терапию (капельницы). при благоприятном исходе капельницы назначают на четвертый-шестой день после начала лечебного курса. Капельницы способствуют очищению организма, снимают признаки интоксикации, освобождают организм от токсичных продуктов распада железосодержащего белка гемоглобина.

Важно! У переболевших пироплазмозом собак стойкий иммунитет не формируется, поэтому не стоит исключать повторного заражения. Неспецифический иммунитет длиться один-два года.

Профилактика пироплазмоза у собак.

После поездки на природу, в лес, каждой прогулки обязательно хорошо осмотрите питомца на наличие присосавшихся клещей. Если на теле обнаружен клещ, сразу же удаляйте его. Отличить инфицирован ли клещ бабезиями визуально невозможно, поэтому обнаружив на теле собаки несколько клещей, не лишним будет посетить ветеринарную лечебную.
После извлечения клеща внимательно наблюдайте за состоянием своего домашнего питомца. При появлении одного из вышеперечисленных признаков незамедлительно свяжитесь с ветеринарным специалистом.

Вылечить животное не возможно без предварительно поставленного точного диагноза. Особенного внимания требуют те болезни, течение которых проходит скрыто, но животное при этом быстро «угасает». К таким заболеваниям относится и пироплазмоз. Диагностика пироплазмоза у собак уже давно отлажена, но существует множество нюансов, о которых нельзя забывать.

Заболевание вызвано простейшим. Ряд Piroplasmidеa включает несколько семейств, и каждый представитель вызывает клинику у определённого животного. Возбудитель пироплазмоза у собак относится к роду Babesia, а заболевание называется - бабезиоз. По старинке его называют пироплазмозом.

в клетках крови собаки - простым делением на два;
в теле клеща - множественным делением (шизогонией).

Возбудитель микроскопичен. Рассматривая его в эритроците можно видеть, что он больше радиуса и захватывает центр клетки.

жизнеспособность;
вирулентность;
возможность размножаться;
при диагностике хорошо прокрашивается, будучи замороженной более 2-х лет.

Собака может заразиться в случае:

низкой резистентности организма;
при большом количестве клещей;
при частом контакте с членистоногими.

Нужно учитывать:

Если фагоцитарная активность организма собаки высока, и ферментативная система не даёт сбой - животное не имеет шансов заболеть. (Иммунитет - залог благополучия);
Не каждый клещ несёт угрозу, а только тот который содержит пироплазму.

Пироплазмоз заболевание специфическое. Клещ заражается от собаки, собака от клеща. Но, если поражение эритроцитов бабезиями у животного менее 1% (начальная стадия болезни)- клещу ничего не угрожает.

Клещ-переносчик засыпает на зиму. Пироплазма в это время претерпевает ряд изменений и весной, просыпается вместе с хозяином.

Укусив собаку, инфицированный клещ заражает её и это проявляется следующими симптомами:

повышение температуры (удерживается 3-4 дня, далее нормализуется);
моча имеет розово-красный иногда бурый цвет (кровавая);
слизистые оболочки бледные (анемичные) затем приобретают желтизну;
животное угнетено;
аппетит понижен или отсутствует.

Если признаки стёрты, заболевание может перейти в хроническую форму. Животное будет:

худеть;
чувствовать себя угнетённым;
слизистые оболочки приобретать попеременную бледность и желтушность;
отказываться от корма.

Иногда самочувствие будет восстанавливаться, но со временем признаки вновь проявятся. Если течение лёгкое, то после подъёма температура понижается, аппетит восстанавливается, моча становится светлой и животное выздоравливает.

Диагностика заболевания основывается на:

эпизоотологических данных;
клинической картине;
результатах лабораторных исследований.

Общий анализ крови

Диагностику можно провести и при взятии периферийной крови непосредственно у животного и немедленной покраске. Методика проведения анализа такова:

Кожу внутренней поверхности ушной раковины собаки протирают спиртом;
Место прохождения видимого капилляра надсекается;
Предметное стекло прикладывается к каплям крови;
Формируется тонкий мазок;
Проводится покраска по Романовского-Гимза;
Исследуется под микроскопом.

В поле зрения микроскопа отлично просматриваются эритроциты, окрашенные в розовый цвет. Если собака больна, то в центре эритроцита будет отчётливо видно пироплазмы в виде грушеобразных включений.

При общем анализе крови, показатели которые подтвердят диагноз пироплазмоз, будут следующие:

эритроциты - количество уменьшится вдвое;
гемоглобин - понизится на 30-35%;
скорость оседания эритроцитов - увеличиться почти в три раза;
лейкоциты - количество понизится.

Будет также выявлен:

анизоцитоз . В здоровом организме нормоцитов (нормальных эритроцитов) 70 %, а мелких (не сформированных, разного размера) 30%. При патологии мелкие эритроциты будут составлять более 50%;

пойкилоцитоз (деформирование эритроцитов). Если в норме они круглые, то при патологии видоизменяются и становятся овальными, приплюснутыми, серповидными, зигзагообразными;

полихроматофиллию. Под действием красителя, в норме, эритроциты окрашиваются одинаково, однотонно. При патологии клетки будут иметь разную степень окраски.

Для определения состояния животного и назначения поддерживающей терапии прибегают к исследованиям крови с развёрнутой формулой.

При пироплазмозе выявляют:

моноцитоз (повышенное содержание моноцитов в крови). Моноциты (разновидность лейкоцитов) образовываются в организме для фагоцитарной борьбы с инфекцией и инвазией и являются своеобразными защитниками;
тромбоцитопинию (пониженное содержание тромбоцитов в крови).

Клинический анализ крови

Не маловажным исследованием крови является и биохимический анализ. При пироплазмозе выявляют:

повышенное количество билирубина, что свидетельствует о разрушении эритроцитов и освобождении гемоглобина, который в печени распадается;
повышенный уровень мочевины, это указывает на нарушение экстракции в почках;
повышение креатина. Показатель, свидетельствующий о патологии почечных клубочков;
повышение уровня альфа амилазы. Это свидетельствует о почечной недостаточности.

Проводя исследования крови при пироплазмозе, следует учесть, что такие показатели как общий белок и глюкоза всегда остаются в норме.

Нередко для диагностики пироплазмоза используется ПЦР (полимеразная цепная реакция). Этот метод очень специфичен и высокоточный, но применим при начальных стадиях заболевания. После проведённого лечения, когда в крови уже нет возбудителя, но остаются его следы (генетический материал) реакция даёт положительный результат. Если ПЦР проводится в начале патологического процесса, то это даёт возможность быстро установить диагноз, назначить лечение и провести терапию.

Важно! При диагностике нельзя полагаться на какой-либо один метод. Только комплексное исследование клинических признаков в тандеме с лабораторной диагностикой может привести к быстрой постановке точного диагноза.

Анализ мочи

При поражении эритроцитов пироплазмами гемоглобин и билирубин попадает в мочу. Гемоглобин окрашивает её в красный цвет, билирубин в тёмно-жёлтый, бурый. Как правило, полный анализ мочи не проводится, а определяются физические свойства (цветность).

Основной задачей анализа является выявление уробилиногена. В норме он составляет 17 мкмоль/л. При распаде эритроцитов уровень значительно повышается.

Большого внимания на анализ мочи не обращают ввиду того, что уробилинген может проявляться при поражениях печени, энтеритах, заболеваниях жёлчного пузыря, запорах. Кроме того, исследование мочи должно быть проведено на протяжении 3-х часов после отбора при условии транспортировки при температуре 2-4 ᵒC.